Peamine erinevus - nitrotselluloos vs PVDF
 

Western blot meetod on meetod, mis võimaldab valguproovist konkreetseid valke tuvastada ja kvantifitseerida. Meetodi töökindlus sõltub sellest, kui valitakse geenist valkude imendumiseks õige membraan. Mikropoorseid membraane on erinevat tüüpi. Nitrotselluloosi- ja PVDF-membraanid on kaks sellist membraani, mida teadlased eelistavad tänu nende eriomadustele teist tüüpi membraanide ees. Valik nitrotselluloosi või PVDF vahel on veel üks väljakutse Western blot analüüsimisel. Nii nitrotselluloosil kui ka PVDF-l on kõrge valkude imendumisvõime. Peamine erinevus nitrotselluloosi ja PVDF membraani vahel on see, et nitrotselluloosmembraanidel puudub võime antikehi riisuda ja membraani taaskasutamine antikehade taastootmiseks, samal ajal kui PVDF membraanidel on eemaldamis- ja taaskasutamisvõime.

SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on nitrotselluloos
3. Mis on PVDF
4. Kõrvuti võrdlus - nitrotselluloos vs PVDF
5. Kokkuvõte

Mis on nitrotselluloos?

Nitrotselluloos on polümeer, mida toodetakse tselluloosi töötlemisel lämmastikhappega, ja seda kasutatakse mikropoorsete membraanide valmistamiseks molekulaarbioloogias, eriti selliste blotimismeetodite jaoks nagu lõuna-, põhja- ja lääne blot. Nitrotselluloosmembraanide poorid on vahemikus 3 kuni 20 urn. Nitrotselluloosi mikropoorid membraanid hõlbustavad membraani pinnal toimuva immunokeemilise reaktsiooni tuvastamist. Seetõttu kasutatakse nitrotselluloosmembraane valkude immobiliseerimiseks ja spetsiifiliste valkude tuvastamiseks Western blot analüüsis. Nitrotselluloosmembraanid võivad immobiliseerida ka glükoproteiine ja nukleiinhappeid.

Mitme tunnuse tõttu on külgvoolukatsetes eelistatavad nitrotselluloosmembraanid. Nitrotselluloosi membraanid absorbeerivad valke suure kontsentratsiooniga. Membraani niisutamiseks kasutatud lahusti ei vähenda nitrotselluloosi membraani valkude imendumist. Nitrotselluloosmembraane saab hõlpsasti soovitud geelisuuruseks lõigata ja valke geelist membraani viia elektrilise või kapillaarülekande abil. Nitrotselluloos võimaldab valkude kiiremat voolamist läbi membraani, millel on suur sidumispotentsiaal. Nitrotselluloos näitab käitlemise parandatud tugevust. Nitrotselluloosmembraani teine ​​eriline omadus on see, et seda saab kergesti liimida mittelahustiteta veekindlate liimidega erinevatele plastikust alustele.

Mis on PVDF?

Polüvinülideendifluoriid (PVDF) on fluoropolümeer, mis saadakse vinülideendifluoriidi polümerisatsioonil ja millel on valkude kõrge immobiliseerimisvõime. Seetõttu kasutatakse PVDF-ist valmistatud mikropoorseid membraane Western blot meetodites spetsiifiliste valkude analüüsimiseks valgu segudest. PVDF membraane saab kasutada ka aminohapete analüüsiks ja valkude järjestamiseks. PVDF-membraani kõige olulisem omadus nitrotselluloosmembraani kohal on see, et selle saab antikehad kergesti eemaldada ja kasutada järgmiste antikehade proovide jaoks.

PVDF membraanid on paksemad kui nitrotselluloosmembraanid; seega vastupidavam kahjustustele korduvkasutamise ajal. PVDF membraanid on väga hüdrofoobsed. Seetõttu tuleb neid enne kasutamist leotada metanoolis või isopropanoolis.

Mis vahe on nitrotselluloosil ja PVDF-il?

Nitrotselluloos vs PVDF
Nitrotselluloos on polümeer, mis koosneb tselluloosist.PVDF on fluoropolümeer, mis saadakse vinülideendifluoriidi polümerisatsioonil.
Membraani pooride suurus
Tüüpilised poorisuurused on 0,1, 0,2 või 0,45 μTüüpilised poorisuurused on 0,1, 0,2 või 0,45 um
Valkude seondumisvõime
Nitrotselluloosi valkude sidumisvõime on 80 kuni 100 μg / cm2.PVDF valkudega seondumise võime on vahemikus 170 kuni 200 μg / cm2.
Tundlikkus
Selle tundlikkus on PVDF-iga võrreldes madal.Sellel on kõrge tundlikkus.
Vähe ekspresseeritud valkude tuvastamine
Kuna tundlikkus on nitrotselluloosmembraanides madal, ei sobi see madala ekspressiooniga valkude tuvastamiseks.See sobib kõrge tundlikkuse tõttu paremini madala ekspressiooniga valkude tuvastamiseks.
Taustamüra
Sellel on madalam taustmüraSellel on suurem taustmüra.
Koostoimed valkudega
Valgu molekulid seostuvad nitrotselluloosi membraanidega hüdrofoobsete interaktsioonide kaudu.Valgud seonduvad PVDF-i membraanidega hüdrofoobse ja dipoolse interaktsiooni kaudu.
Membraani olemus
Nitrotselluloos on habras ja habras. Nitrotselluloosi versioonid on siiski saadaval ja need on vastupidavad.PVDF on vastupidavam ja sellel on suurem keemiline vastupidavus.
Võime riisuda ja uuesti kasutada
Nitrotselluloosil võib olla raskusi signaali kadumiseta ribade eemaldamisel ja uuesti reprodutseerimisel.PVDF sobib ideaalselt rakenduste reprodutseerimiseks ja järjestamiseks.
Sobivus
Nitrotselluloos sobib ideaalselt madala molekulmassiga valkude tuvastamiseks.PVDF on sobivam suurema molekulmassiga valkude tuvastamiseks.
Muud kasutusviisid
Nitrotselluloosi saab kasutada nukleiinhapete analüüsiks ja punkti / pilu blotimiseks.PVDF-i saab kasutada valkude järjestamiseks ja tahke faasi analüüsisüsteemideks.
Maksumus
See on odavam kui PVDF-i membraanid.See on kallim kui nitrotselluloosmembraanid.
Vajadus eelnevaks niisutamiseks
Nitrotselluloosmembraanid ei vaja metanooliga eeljahutamistPVDF-i membraanid vajavad eelnevat metanooliga immutamist.

Kokkuvõte - nitrotselluloos vs PVDF

Nitrotselluloosmembraanid olid esimesed membraanid, mida kasutati külgvoolu analüüsis. Neil on suur valkude imendumisvõime. Seetõttu kasutatakse lääne blotimisel nitrotselluloosi membraane. PVDF on veel üks membraanitüüp, mida kasutatakse Western blot-is ja sellel on ka kõrge valkude imendumisvõime. Mõlemat tüüpi kasutatakse Western blot analüüsis valkude analüüsiks. PVDF-i membraanidel on aga rohkem erilisi omadusi, mis muudavad need Western blot-meetodil sobivamaks kui nitrotselluloosmembraanid. Kuid nitroselluloosmembraanid sobivad paremini madala molekulmassiga valkude detekteerimiseks, PVDF membraanid sobivad paremini kõrge molekulmassiga valkude detekteerimiseks. See on erinevus nitrotselluloosi ja PVDF membraanide vahel.

Pilt viisakalt:
1. „Western blot transfer“ - Bensaccount inglise Vikipeedias (CC BY 3.0) Commonsi Wikimedia kaudu

Viide:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun ja Thomas A. Neubert. “Nitrotselluloosmembraanide kasutamine valkude iseloomustamiseks maatriks-abil toimuva laseri desorptsiooni / ionisatsiooni massispektromeetria abil.” Analüütiline keemia. USA Riiklik Meditsiiniraamatukogu, 15. juuli 2006. Veeb. 28. märts 2017
2. Molekulaarsed markerid ja taimebiotehnoloogia. Google Books. N.p., n.d. Võrk. 28. märts 2017
3.Minädal, 8. aprill 2013 Tweet. “Maagia membraanis: valige targalt Best Westerni blotitulemuste saamiseks.” Biocompare. N.p., 8. aprill 2013. Veeb. 28. märts 2017